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Evaluación de la técnica PCR en tiempo real en el diagnóstico de la toxoplasmosis en gestantes del departamento de Sucre

Resumen en español

La toxoplasmosis es una enfermedad parasitaria producida por Toxoplasma gondii, el cual infecta a animales de sangre caliente, incluido el hombre; la importancia médica de esta parasitosis reside, principalmente, en la forma congénita y la reactivación en el inmunodeprimido. El diagnóstico de infección congénita se realiza a través del empleo de técnicas serológicas fundamentadas en la detección de anticuerpos específicos contra el parásito, sin embargo, estas pruebas muchas veces pueden arrogar resultados falsos positivos y falsos negativos lo que interfiere en la interpretación y manejo adecuado de los casos de infección, debido a que la mayoría de ellas, emplean taquizoitos intactos o extractos antigénicos solubles del parasito; por otro lado, estas pruebas dependen del tiempo de aparición de cada anticuerpo y del estado inmunológico del paciente. Además, tienen una baja sensibilidad y especificidad en la detección de casos activos de toxoplasmosis. En respuesta a esta falta de especificidad y sensibilidad en el diagnóstico de la enfermedad, esta investigación propone evaluar nuevas herramientas que permitan establecer un diagnóstico certero y oportuno de la toxoplasmosis. Este trabajo tuvo como objetivo evaluar la utilidad de la PCR en tiempo real en la detección de ADN de T. gondii en muestras de sangre periférica de gestantes con diagnóstico serológico confirmado por la técnica Elisa IgG e IgM anti-T.gondii. De un total de 220 muestras de sangre periférica de gestantes con serología confirmada para T.gondii, solo fue posible detectar el parasito en 23 muestras, lo que corresponde una frecuencia de detección de ADN de Toxoplasma del 10,5%. En las pacientes que presentaron toxoplasmosis reciente, el ADN de Toxoplasma fue detectado en 12 de 17 lo que corresponde a una sensibilidad diagnóstica del 70,58%, mientras un 4,6 % de positividad fue encontrado en el grupo de infección crónica (6/128). En el tercer grupo compuesto de gestantes negativas para la infección por T.gondii, el ensayo fue positivo en el 6,6% de los casos (5/75). Los análisis estadísticos revelaron que la probabilidad de que un paciente IgM positivo presente parasitemia detectada por el ensayo TaqMan fue de 13,02 (odds ratio value) mayor que en un individuo IgM negativo (p<0.05). Considerando los datos obtenidos en ambos grupos IgM negativos, la PCR en tiempo real mostró que el 97,5% de las muestras fueron negativas para la infección por T.gondii, revelando una alta especificidad calculada usando el grupo I como grupo enfermo (IgM +) y el grupo II + III como grupo no enfermo (IgM-). El PCR cuantitativo en tiempo real para el elemento repetido de T.gondii fue capaz de detectar y cuantificar el ADN del parasito en mínimas cantidades (desde 0.04 hasta 1,63 copias/ml), permitiendo de este modo estimar así la carga parasitaria de las gestantes positivas que varía de 0.06 hasta 3 equivalentes de genomas de taquizoitos por mililitro de sangre, indicando bajos niveles de parasitemia en las gestantes infectadas. Estos resultados demuestran que la PCR en tiempo real es una herramienta útil para el mejoramiento del diagnóstico de la toxoplasmosis.