Aislamiento de protoplastosa partir de mesofilo de Dioscorea alata c.v. pico de botella

Bustamante Mendoza, Elvis Emiro | 2007

Un protoplasto vegetal es una célula que carece de pared celular, se encuentra rodeada por su membrana plasmática y es potencialmente capaz de regenerar la pared celular, crecer y dividirse. Los protoplastos son una herramienta fundamental para muchas investigaciones de biología básica y aplicada entre ellas, la obtención de clones resistentes a diversos patógenos fitosanitarios. Los protoplastos de Di"oscorea alafa (c.v. Pico de Botella) fueron aislados de células del mesofilo de vitroplantas por medio del método mecánico, realizando plasmolisis en solución de sacarosa 0.7M, seguida de maceración, filtración, centrifugación y lavado en solución de sacarosa 0.4 M; de igual manera, se utilizó el método enzimático, combinando cuatro concentraciones de Celulasa onozuka R1O (O.O, 0.5, 1.0 y 1.5%), con cuatro concentraciones de Macerozima R1O (O.O, 0.2, 0.4, 0.5%), a tiempos de incubación de 6, 1O, 14 y 18 horas y un pH de 5.6. Para lo cual se incubaron aproximadamente 0.015 gramos de hoja en medio de aislamiento de protoplastos de ñame (MAPÑ) a una temperatura de 27± 2ºC, agitado a 40 r.p.m. en agitador rotatorio, seguido de lavado en MAPÑ sin enzimas, purificación en sacarosa al 24 % y resuspension en medio de cultivo de protoplastos de ñame (MCPÑ); la viabilidad de los protoplastos aislados se evalúo por tinción con azul de Metileno 0.01% y fue confirmada a través de cultivo en medio MCPÑ liquido y en MCPÑ solidificado con 5g/L de agar. La mayor cantidad de protoplastos viables se obtuvo combinando 0.5 % de Celulasa Onozuka R10 con 0.2 % de Macerozima R10 y un tiempo de incubación de 14 horas, con un promedio de 1.95 x 105 protoplastos viables por mililitro, equivalente a 13 x 106 protoplastos por gramo de tejido. Los análisis de regresión de los datos obtenidos arrojaron, que las condiciones óptimas para obtener la mayor cantidad de protoplastos viables corresponden a una combinación de 0,97 % de Celulasa onozuka R10 y 0,36 % de Macerozima R10 y un tiempo de incubación de 13,82 horas con un máximo estimado de 262923 protoplastos/mL (equivalente a 17,5 x 106 protoplastos/gramo de tejido). Por el método mecánico se aisló en promedio 3.3 x 103 protoplastos viables/mL (equivalente a 22 x 104 protoplastos/gramo de tejido), lo que deja ver las bondades del método enzimático para el aislamiento de los mismos, sin embargo, ambos procesos nos permiten aislar protoplastos viables, con capacidad de regenerar su pared celular, crecer, dividirse y formar microcolonias y microcallos, observandose la formación de microcolonias a partir de los 8 dias en cultivo liquido y la formación de microcallos a partir de las 5 a 6 semanas de cultivo en medio sólido.

Aplicación de la técnica in vitrio para la propagación de Dioscorea cayenensis cv "Ñame amarillo" a partir de segmentos nodales

Brun Rocha, Alejandro Javier | 2003

Estos resultados sugieren que los explantes basales de las plántulas son adecuados para la producción masiva de plantas. Además, coincidiendo con los resultados obtenidos por Mitchell et al., 1995, se comprobó que la adición de 800 mgL-1 de NH4 N03, incrementó la respuesta de los brotes en la etapa de multiplicación. Aunque en la etapa de enraizamiento hubo un bajo porcentaje de raíces, se logró obtener plantas completas con la arquitectura necesaria para el proceso de adaptación a las condiciones ambientales.

Caracterización morfológica e identificación molecular de Colletotrichum spp causantes de la antracnosis del ñame dioscórea spp en el..

Lavalett Oñate, Lelia | 2005

El género Colletotrichum se encuentra ampliamente distribuido en cultivos económicamente importantes en el ámbito mundial , ya sea causando enfermedades como la antracnosis de las hojas, muerte regresiva, quemazón de los frutos o formando parte del ecosistema bajo una acción saprofítica. (Martínez y Zambrano. , 1994). El ñame, (Familia Dioscoreacea, género Dioscórea), es una planta que se presenta como una enredadera y se caracteriza por la presencia de tubérculos carnosos o rizomas subterráneos y/o aéreos, los cuales ocupan un lugar preponderante dentro de la alimentación humana (Perea y Buitrago, 2000). El cultivo de ñame, es uno de los cultivos de mayor importancia económica y alimenticia en las regiones tropicales y subtropicales de alta pluviosidad, pero la mayor limitación para la producción sostenible de sus especies comerciales es la susceptibilidad a la enfermedad de la antracnosis ejerciendo un impacto negativo sobre su productividad. (Abang., 2003a) . El área mundial cultivada con ñame comprende tres regiones principales: África occidental, sur de Asia y los países del caribe. (Perea y Buitrago., 2000). Entre los países Africanos el principal es Nigeria, con el 75% de la producción mundial, en donde las especies mas cultivadas corresponden a Dioscórea afata. L y Dioscórea rotunda/a poir, siendo la primera la preferida en la producción de tubérculos para el consumo humano y para la exportación, pero la más susceptible a la antracnosis. (Abang et al , 2002).

Desarrollo de metodologías para el enraizamiento in vitro de Dioscorea cayenensis Cv "Ñame amarillo" y su aclimatación a condiciones in vivo

Garrido Correa, Alberto Jonathan | 2005

La costa atlántica colombiana es una región productora de ñame por excelencia, y dada la gran demanda de los mercados internacionales por Di"osco1ea cé.yenensis y su alto precio, convierten a este tipo de ñame en un producto con gran potencial económico para esta zona del país. Es por esto que el desarrollo de sistemas de producción masiva de plantas, como los sistemas de cultivo in vit10, ofrecen una alternativa limpia para producir material de optima calidad, supliendo la demanda de semilla sana. A partir de plantas en invernadero, se obtuvieron segmentos nodales de D. Cé.yenensis Cv "ñame Amarillo", los cuales se establecieron y multiplicaron hasta un tercer subcultivo en el laboratorio de cultivo de tejidos vegetales de la Universidad de Sucre, siguiendo el protocolo propuesto por Pérez y Brun en el 2003. Las plántulas obtenidas fueron enraizadas en medio MS (Murashige y Skoog) sólido, suplementado con 100 mg/L de mioinositol, 0.1 mg/L de tiamina-HCI, 30 g/L de sacarosa, 7 g/L de agar, 1 g/L de carbón activado, evaluando diferentes concentraciones de los reguladores de crecimiento ácido indol-acético (AIA), ácido indol-butírico (AIB), ácido naftalen-acético (ANA) y ácido 2,4-dicloro-fenoxiacético (2,4-D), e incubados en cuarto de crecimiento a 27°C, con fotoperíodo de 12 horas, con diferentes intensidades lumínicas, como resultado se obtuvo un promedio total de 30,18 raíces por planta, con una longitud promedio de raíces primarias de 8,23 cm, al igual que un promedio de hojas nuevas y numero de nudos nuevos de 3,43 y 3,33 respectivamente. El ANAVA no mostró diferencia significativa entre los tratamientos con reguladores de crecimiento, pero se observó diferencia estadística significativa al 5% entre los bloques, siendo el bloque expuesto a una intensidad lumínica promedio de 4,3 µmol m-2s-1 el que ofreció los valores promedio mas favorables para las variables en estudio. El proceso de aclimatación in vi110 de vit10 plantas de Di"osco1ea cé.yenensis, no se ve influenciado de manera diferencial por la presencia o ausencia de inóculos de hongos micorizógenos MYCORAL®, pero sí por el desarrollo de estas plantas en un micro ambiente tapado, con diferencia estadística significativa al 1o/o para el tamaño de las plantas, 0.1 o/o para el numero de hojas nuevas y 5% para el numero de hojas muertas, según el análisis de varianza. El porcentaje de supervivencia de las plántulas en un micro ambiente tapado fue del 96.6%.

Estandarización de la técnica de micropropagación para la obtención masiva de plantas de ñame espino (Dioscorea rotundata) mediante el cultivo in vitro de segmentos nodales

Acosta Pineda, Roberto Carlos | 2000

Para la micropropagación de ñame espino (D. rotundata) se utilizaron plantas madre de 2 a 3 meses de edad de las cuales se tomaron los explantes (segmentos nodales). Estos fueron sometidos inicialmente a diferentes tratamientos de desinfección resultando eficiente la aplicación de peróxido de hidrógeno (H202) 2% por 45 segundos, etanol 70% por 45 segundos e hipoclorito de sodio (NaOCl) 1% por 20 minutos con enjuagues intermedios de agua destilada. Los explantes cortados longitudinalmente fueron sembrados en medio de cultivo Murashige y Skoog "MS" (1962) con adición de 30 gr/l de sacarosa, 6,5 gr/l de agar y diferentes combinaciones hormonales ANA-KIN y ANA-BAP por separado en concentraciones de 0,1 mg/l y 0,3 mg/l respectivamente, siendo la combinación ANA­ BAP eficiente para el establecimiento de explantes y la formación de múltiples brotes, y la combinación ANA-KIN para la inducción de nudos y la maduración de las plántulas. La vigorosidad de los brotes disminuyó después de 5 ciclos de subcultivo bajo la acción de la combinación ANA-KIN y se mantuvo constante durante 10 ciclos de subcultivo bajo la acción de la combinación ANA-BAP. El enraizamiento de las plantas se logró con la adición al medio de cultivo de ANA en concentración de 0,2 mg/l y una reducción de sales al 50% y de sacarosa al 1.5% con un fotoperíodo de 8 horas luz y 16 de oscuridad. La humedad relativa del interior de los recipientes de cultivo fue controlada mediante la utilización de un sistema de sellado consistente en papel aluminio perforado cubierto con una película plástica semipermeable (PPA), lo cual facilitó la aclimatación de las plantas en invernadero y campo, alcanzándose un 97% promedio de supervivencia.

Estudio cromosómico de cuatro especies de ñame (dioscorea Spp)

Espinosa Voza, Vivian Lorena | 2008

El género Dioscorea comprende alrededor de 650 especies distribuidas ampliamente en las regiones tropicales del mundo, en donde constituye la base fundamental de la alimentación y la economía; son plantas dioicas, con floración irregular y asincrónica y poco desarrollo de semilla sexual, por lo que son propagadas vegetativamente, este hecho ha generado poca variabilidad genética entre las especies de ñame, y consecuentemente muchos genotipos han sido reportados como susceptibles a plagas y enfermedades. Se hace necesario entonces la búsqueda de genotipos élites con adaptación ecológica y resistentes a patógenos, para lo cual es importante investigar el rango de diversidad existente, desafortunadamente, en Colombia a diferencia de África, los cultivares tradicionales no han sido recolectados, caracterizados y analizados adecuadamente y se desconocen varios aspectos fundamentales como los niveles de ploidía de la mayoría de las especies, característica relacionada con procesos como la esterilidad, tolerancia a condiciones de estrés y resistencia al ataque de patógenos. A raíz de lo anterior se hizo necesaria la estandarización de un protocolo para el estudio de los niveles de ploidía de las especies de ñame presentes en el Banco de germoplasma del Laboratorio de Biotecnología Vegetal de la Universidad de Sucre, como un primer paso en la caracterización y el monitoreo de la variación somaclonal que pueda ocurrir en los sistemas de propagación in Vitro del género. Por lo cual se estandarizó un protocolo para la obtención de metafases y determinación del número cromosómico a partir de meristemos radicales, evaluando cuatro concentraciones (0, 1, 2, 4 mM) y tres tiempos de exposición (3, 6 y 12 horas) del antimitótico 8-Hidroxiquinolina; para la hidrólisis de la pared celular se probaron diferentes concentraciones y tiempos de acción del HCl; y se utilizaron tres tipos de coloración para la observación de los cromosomas (Schiff, Giemsa y aceto-orceína). El mejor tratamiento para la obtención de cromosomas metafásicos fue la utilización de 2 mM de 8- Hidroxiquinolina durante 6 horas para las especies D. alata, D. rotundata y D. cayennensis, mientras que en D. trífida estuvo constituido por 8- Hidroxiquinolina 4 mM durante 6 horas. La hidrólisis más efectiva se obtuvo con HCl 5 N por 90 minutos, y el mejor colorante fue la aceto- orceína. Los números cromosómicos fueron constantes en los individuos de D. alata y D. trífida con 2n = 20 y 2n = 30 respectivamente, a diferencia de D. rotundata y D. cayennensis donde se encontró inestabilidad en el número de cromosomas con 2n = 20, 30 y 2n = 30, 38, 40 respectivamente.

Evaluación de factores que influencian la inducción, formación y desarrollo de microtubérculos en ñame (Dioscorea alata L.) var. "Pico de botella"

Salazar Díaz, Robinson | 2002

Evaluación de la incidencia de la enfermedad de la virosis del ñame (Dioscorea sp) en cinco municipios del Departamento de Sucre

Payares Díaz, Iris Rocío | 2002

El ñame pertenece a la familia Di"oscoraceae, se compone de diez géneros y alrededor de 650 especies. Estos tubérculos son consumido por una gran parte de las poblaciones de África occidental, el suroeste de Asia, Oceanía, América tropical y el Caribe. En Colombia se cultiva en la Costa Caribe, los genotipos cultivados pertenecen a las especies Di"oscorea a/ata y Di"oscorea 1otuna'afa. La producción se da en arreglos de cultivo con maíz y yuca o en monocultivo principalmente. Uno de los factores que más limita la producción del ñame en Colombia son las enfermedades, ocasionadas por hongos y virus. Pero son los virus los más importantes agentes causantes de enfermedades, ocasionando la disminución en la producción de los tubérculos y perdidas económicas significativas. En este estudio preliminar sobre: "Evaluación de la incidencia de la enfermedad de la virosis del ñame en cinco municipios del departamento de Sucre", se detectó la presencia de Po/y virus afectando los cultivos. Para el diagnostico de los virus se utilizaron las pruebas de ELISA - DAS indirecta y transmisión mecánica. La incidencia calculada a partir de la sintomatología arrojó valores entre 38% y 82.5%. Además, al comparar la producción relativa de tubérculos de plantas sintomáticas con asintomáticas de D. alafa cv. "oso", D. a/ata cv. "Diamante 22" y D. 1otuna'afa, recolectadas al azar, se observaron disminuciones en el peso de los tubérculos entre 87.7 a 96.3 %, 92.5 a 95.5 % y 84.3 a 96.27 % respectivamente. Por lo cual es necesario extremar sistemas de monitoreo y control que garanticen la sostenibilidad económica del cultivo para el pequeño agricultor.

Evaluación de la modificación vía enzimática del almidón de ñame (Dioscorea trifida) utilizando a-Amilasa (Termamyl 120 L, tipo L) para sus posibles aplicaciones

Carmona Camargo, Jesús | 2007